الشيلاجيت: الفوائد والاستخدامات والتركيبات والمكونات والطريقة والجرعة والآثار الجانبية

 

عقار ميتالودروغ رانيتيدين بزموت سترات يمنع تكاثر SARS-CoV-2 ويخفف الالتهاب الرئوي المرتبط بالفيروس في الهامستر السوري

نبذة مختصرة

يتسبب فيروس SARS-CoV-2 في تفشي جائحة COVID-19 ، مع ارتفاع معدل العدوى ووفيات كبيرة 1.

 حاليًا ، الخيارات العلاجية لـ COVID-19 محدودة. 

من الناحية التاريخية ، وجدت المركبات المعدنية استخدامها كعوامل مضادة للميكروبات ، ولكن نادرًا ما تم استكشاف أنشطتها المضادة للفيروسات. 

هنا ، نقوم باختبار مجموعة من العقاقير المعدنية والمركبات ذات الصلة ، وتحديد رانيتيدين سترات البزموت ، وهو دواء شائع الاستخدام لعلاج عدوى هيليكوباكتر بيلوري ، كعامل قوي مضاد لـ SARS-CoV-2 ، سواء في المختبر أو في الجسم الحي. 

أظهر سيترات البزموت الرانيتيدين سمية منخفضة للخلايا وخلايا مصابة بـ SARS-CoV-2 محمية بمؤشر انتقائية مرتفع يبلغ 975. 

والأهم من ذلك ، قمع سيترات البزموت رانيتيدين تكاثر SARS-CoV-2 ، مما أدى إلى انخفاض الأحمال الفيروسية في كل من الجهاز التنفسي العلوي والسفلي ، وتخفيف الالتهاب الرئوي المرتبط بالفيروس في نموذج الهامستر السوري الذهبي.

 أظهرت الدراسات في المختبر أن سترات البزموت رانيتيدين والمركبات ذات الصلة أظهرت تثبيطًا تجاه كل من ATPase (IC50 = 0.69 ميكرومتر) وفك الحمض النووي (IC50 = 0.70 ميكرومتر) لأنشطة SARS-CoV-2 هيليكاز عبر إزاحة لا رجعة فيها من الزنك ( II) أيونات من الإنزيم بواسطة أيونات البزموت (III). 

تسلط النتائج التي توصلنا إليها الضوء على الهليكاز الفيروسي كهدف صالح للأدوية والإمكانات السريرية لأدوية البزموت (III) أو العقاقير المعدنية الأخرى لعلاج عدوى SARS-CoV-2.

يعد الوباء المستمر لمرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19) ، الناجم عن متلازمة الالتهاب التنفسي الحاد الوخيم 2 (SARS-CoV-2) ، أزمة صحية عامة عالمية مع أكثر من 30 مليون حالة مؤكدة مختبريًا ، بما في ذلك أكثر من مليون حالة وفاة على مستوى العالم بحلول نهاية سبتمبر 2020.

 يشكل هذا الوباء تحديًا غير مسبوق للتحديد السريع للأدوية الفعالة للوقاية من هذا المرض وعلاجه. 

على غرار فيروسات كورونا الأخرى 4 ، يصنع SARS-CoV-2 مجموعة من الإنزيمات والبروتينات الفيروسية الضرورية للدخول الفيروسي والتكاثر والإمراض ، بما في ذلك البروتينات الهيكلية والبروتينات غير الهيكلية (Nsp).

 يسمح التدخل عند دخول الفيروس أو تكاثره بأن تكون اللقاحات أو العلاجات فعالة 6،7،8،9،10. العديد من الإنزيمات 11 ، 12 ، 13 ، بما في ذلك RNA المعتمد على RNA polymerase ، 3-chymotrypsin-like protease و papain-like protease ، قد تكون بمثابة أهداف واعدة للأدوية العلاجية المحتملة.

تعد إعادة استخدام الأدوية المستخدمة بالفعل في الاستخدام السريري هي الطريقة الأكثر عملية للتعرف السريع على مضادات الفيروسات لـ COVID-19 ، نظرًا لإلحاح الجائحة وشدتها. 

تم الإبلاغ عن Remdesivir ، وهو دواء مضاد للفيروسات واسع النطاق ، فعاليته ضد SARS-CoV-216. 

إنها تظهر فوائد متواضعة ، مع انخفاض متوسط ​​الوقت اللازم لتعافي المريض بحوالي 4 أيام من 15 يومًا ، بالإضافة إلى انخفاض طفيف في معدل الوفيات. 

ومع ذلك ، فإن النقص العالمي للعقار ، والسعر المرتفع نسبيًا ، وعدم وجود فوائد سريرية كبيرة في المرضى الذين يعانون من COVID-19 الحاد قد حد حتى الآن من استخدامه على نطاق واسع أظهر الديكساميثازون مؤخرًا قدرته على تقليل معدل وفيات المرضى ، خاصةً بين المصابين بفيروس كوفيد -19 الشديد والذين يحتاجون إلى تهوية ميكانيكية 1

ومع ذلك ، قد يترافق الديكساميثازون مع كبت المناعة والتهابات المستشفيات الانتهازية ، وقد أظهر فوائد محدودة في المرضى الذين يعانون من COVID-19 الخفيف ولا يحتاجون إلى دعم تنفسي.

 لقد أبلغنا مؤخرًا عن الفوائد السريرية للعلاج المركب الثلاثي لكل من interferon-β1b و lopinavir-ritonavir و ribavirin في علاج مرضى COVID-1920. 

ومع ذلك ، فإن بعض المرضى ظهرت عليهم آثار جانبية ، مثل ضعف الكبد واضطراب الجهاز الهضمي.

 تحاول التجارب السريرية الأخرى الجارية على سلسلة من العوامل المضادة للفيروسات جاهدة تحسين النتائج السريرية للمرضى. لذلك ، هناك حاجة ماسة إلى مزيد من الجهود لتقييم مجموعة واسعة من الأدوية المعتمدة سريريًا من خلال استراتيجيات بديلة.

في محاولة لإعادة استخدام العقاقير المعدنية والمركبات ذات الصلة مثل علاجات COVID-19 ، اكتشفنا أن رانيتيدين سترات البزموت (RBC) ، وهو دواء شائع الاستخدام مع ملف دوائي آمن وشامل ، 

يمنع بشكل فعال تكرار SARS-CoV-2 في الإنسان و خطوط الخلايا الحيوانية وفي نموذج هامستر سوري ذهبي من خلال تعطيل وظائف هيليكس وربما الإنزيمات الفيروسية الأساسية الأخرى.

 تشير النتائج التي توصلنا إليها إلى أن كرات الدم الحمراء وغيرها من العقاقير المعدنية كعلاجات محتملة لـ COVID-19.

النتائج

تظهر مركبات معدنية مختارة نشاطًا قويًا ضد SARS-CoV-2 في المختبر

تاريخيا ، تم استخدام المركبات المعدنية كعوامل مضادة للميكروبات. 

ومع ذلك ، لم يتم استكشاف أنشطتها المضادة للفيروسات على نطاق واسع. 

أظهرت دراساتنا السابقة أن عقاقير البزموت والمركبات ذات الصلة تظهر نشاطًا ممتازًا مضادًا للفيروسات ضد SARS-CoV.

 بناءً على هذه النتائج ، اخترنا ستة مركبات معدنية - اثنان من البزموت (III) من الأدوية القائمة على السترات (البزموت الغرواني subcitrate (CBS) و RBC ، واثنان من البزموت (III) البورفيرين (Bi (TPP) (TPP ، 

tetraphenylporphyrinate) و Bi (TPyP ) (TPyP، tetra (4-pyridyl) porphyrin))، دواء واحد أساسه Au (I) (Auranofin) ، بالإضافة إلى مشتقه النشط ، chloro (triethylphosphine) gold (I) (Au (PEt3) Cl) - 

حتى إجراء تقييم أولي ضد SARS-CoV-2 في المختبر (بيانات موسعة الشكل 1). 

تم تحديد تركيزات السمية الخلوية بنسبة 50٪ (CC50) لهذه المركبات في خلايا Vero E6 الكلوية القرد لتكون 3254 ± 21 ميكرومتر لـ CBS ، 2،243 ± 43 ميكرومتر لـ RBC ،> 400 ميكرومتر لكل من Bi (TPP) و Bi (TPyP) ، 14.2 ± 1.3 ميكرومتر للأورانوفين و 13.5 ± 1.8 ميكرومتر لـ Au (PEt3) Cl (البيانات الموسعة الشكل 2). 

البزموت الأربعة ( III) تم إعطاء الأولوية للمركبات لإجراء مزيد من التقييم لقيم CC50 الخاصة بها في خلايا Caco-2 القولون والمستقيم البشرية نظرًا لسميتها 

الخلوية المنخفضة الواعدة مقارنة بالأدوية المستندة إلى Au (I) ، مما أدى إلى قيم CC 50 مماثلة تتراوح من 40 من 0 إلى 3740 ميكرومتر (بيانات موسعة الشكل 2). 

لتقييم قوتها المضادة للفيروسات ، تم تحديد الجرعات الفعالة نصف القصوى (EC50) لمركبات البزموت (III) عند مستويات منخفضة من الميكرومولار مثل 4.6 ± 0.4 

ميكرومتر لـ CBS ، 2.3 ± 0.5 ميكرومتر لـ RBC ، 3.9 ± 1.2 ميكرومتر لـ Bi ( TPP) و 7.5 ± 0.9 ميكرومتر لـ Bi (TPyP).

 بشكل ملحوظ ، أدت إضافة جميع مركبات البزموت الأربعة (III) عند الإصابة بعد ساعة واحدة (hpi) إلى تقليل أحمال الحمض النووي الريبي الفيروسي في كل من خلايا Vero E6 و Caco-2 بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 1). 

في التركيزات غير السامة ، أظهر CBS و RBC نشاطًا أكثر فاعلية لمكافحة SARS-CoV-2 من Bi (TPP) و Bi (TPyP) ، 

كما يتضح من الحد الأقصى ~ 2-log مقابل 1-log تقليل الحمل الفيروسي في Vero محلل خلية E6 (الشكل 1 أ-د) ، ~ 3-log مقابل ~ 2-log في محللة خلية Caco-2 (الشكل 1e-h) ، ~ 4-log مقابل ~ 3-log تخفيض في Vero E6 طاف ثقافة الخلية (الشكل 1i - l) و ~ 4-log مقابل ~ 3-log تخفيض في Caco-2 ثقافة الخلية طاف (الشكل.

أصيبت خلايا Vero E6 و Caco-2 بـ SARS-CoV-2 (تعدد العدوى (MOI) = 0.1) وعولجت بتركيزات مختلفة من كرات الدم الحمراء والمركبات ذات الصلة ، كما هو محدد. 

a - h ، تم الكشف عن الأحمال الفيروسية داخل الخلايا عند 48 ساعة في البوصة. وتطبيعها بواسطة الأكتين البشري في خلايا Vero E6 (a-d) وخلايا Caco-2 (e-h). i - p ، تم تحديد نسخ الفيروس في طاف ثقافة الخلية عند 48 ساعة في البوصة. 

عن طريق تفاعل البلمرة المتسلسل النوعي مع النسخ العكسي (qRT – PCR) في خلايا Vero E6 (i - l) وخلايا Caco-2 (m - p). استندت مقاييس تركيز الدواء على المحتوى المعدني. يتم عرض جميع النتائج على أنها تعني ± sd. 

تم حساب الدلالة الإحصائية باستخدام اختبار الطالب غير المزدوج الذيل (ن = 3) ؛ * P <0.05 ، ** P <0.01 و *** P <0.001 بالمقارنة مع التحكم في السيارة (0 ميكرومتر). تم إجراء جميع التجارب في ثلاث نسخ وتكررت مرتين للتأكيد.

الأهم من ذلك ، أن أدوية / مركبات البزموت (III) تثبط بشكل كبير السارس- CoV-2 ، كما يتضح من الانخفاض الملحوظ في التعبير عن البروتين النووي الفيروسي في الخلايا المعالجة بالدواء عند مقارنتها بمجموعة ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) المعالجة (الشكل 2 أ-) F). 

للتحقيق في خطوات دورة تكرار SARS-CoV-2 التي توقفت عن طريق مركبات الدواء المختارة ، أجرينا اختبار وقت إضافة الدواء عن طريق معالجة الخلايا المصابة بالفيروس مع كل مركب في نقاط زمنية مختلفة ، 

متبوعة بقياسات لـ العيار الفيروسي بعد 9 hpi ، عندما تم اكتشاف الجولة الأولى من virions النسل في طاف ثقافة الخلية. (الشكل 2 ز ، ح). 

a – e ، صور تلطيخ مناعي تظهر التأثيرات المضادة لـ SARS-CoV-2 لمركبات الدواء المختارة. تم إجراء التثبيت والتلوين على الخلايا المصابة بـ SARS-CoV-2 (MOI = 0.1) من خلايا Vero E6 بعد العلاج باستخدام التحكم DMSO (a) و CBS (b) و RBC (c) و Bi (TPP) (d) و Bi ( TPyP) (ه) لمدة 24 ساعة. 

تم تلوين البروتين النووي لمضادات السارس- CoV-2 (SARS-CoV-2-N) ونواة الخلية (DAPI) باللونين الأخضر والأزرق على التوالي. 

أشرطة مقياس ، 100 ميكرومتر. f ، التحديد الكمي للخلايا الإيجابية للمستضد من حقول 800 × 800 بكسل مختارة عشوائيًا (ن = 4) عبر تجربتين مستقلتين (تحليل التباين أحادي الاتجاه ، ANOVA). يشير NP إلى بروتين nucleocaspid لـ SARS-CoV-2. g ، h ، اخ

تبار وقت إضافة الدواء ، يتم إجراؤه لتحديد خطوات دورة تكرار الفيروس التي يستهدفها كل من المركبات الدوائية الأربعة. 

في g ، يُظهر المخطط التصميم التجريبي ، مما يشير إلى فترة حضانة مركب الخلية.

 تم إجراء امتصاص الفيروس عند حوالي 0-1 ساعة (وزارة الداخلية = 2) ، متبوعًا باستبدال الوسط الجديد المضاف إليه العقار المختبَر أو DMSO. 

في h ، تُظهر المخططات الشريطية عائدات الفيروس في المادة الطافية لجميع المجموعات ، والتي تم قياسها بواسطة qRT-PCR عند 9 ساعات في البوصة. تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه لمقارنة مجموعات العلاج مع مجموعة التحكم السلبية (0 ميكرومتر ، 0.1 ٪ DMSO).

 أنا ، HEK293-hACE2 أصيبت الخلايا المستقرة بـ Pseudo-SARS-CoV-2-Luc في وجود DMSO أو المركبات الدوائية ، كما هو موضح (ن = 3). تم قياس نشاط Luciferase عند 48 ساعة في البوصة. 

وتطبيع كنسبة مئوية من تحكم DMSO. 

تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه. استندت مقاييس تركيز الدواء على المحتوى المعدني. يتم عرض جميع النتائج على أنها تعني ± sd. من العدد المشار إليه من التكرارات البيولوجية. تم حساب الدلالة الإحصائية باستخدام اختبار t للطالب ثنائي الذيل غير مزدوج ، * P <0.05 ، ** P <0.01 و *** P <0.001. تم تكرار جميع التجارب مرتين للتأكيد.

ومن المثير للاهتمام ، أن إضافة Bi (TPyP) أثناء المعالجة المسبقة أو الحضانة المشتركة للخلايا قمعت بشكل كبير تكاثر الفيروس ، في حين لم يتم العثور على أي تأثير يمكن اكتشافه عندما تم الحفاظ على Bi (TPyP) بعد دخول الفيروس ، مما يشير إلى أن Bi (TPyP) قد يتداخل مع السارس -CoV-2 مرفق بالسطح الخلوي. 

لم يؤثر RBC على تكاثر الفيروس عند إضافته خلال مرحلة ما قبل الحضانة ، في حين أنه قلل من الأحمال الفيروسية بمقدار 2 سجل تقريبًا عند إضافته أثناء الحضانة المشتركة ومراحل ما بعد الدخول ، مما يشير إلى أن RBC هو عقار متعدد الأهداف يعمل أثناء دخول الفيروس / الاستيعاب أو الأحداث المبكرة بعد الدخول الفيروسي. 

للتحقق من صحة ذلك ، تم تأكيد مقاطعة دخول الفيروس بواسطة RBC و Bi (TPyP) بواسطة اختبار عدوى فيروس النمط الكاذب ، مما يدل على أن النسبة المئوية لإدخال الفيروس قد تم تخفيضها بنسبة 45٪ و 53٪ بواسطة RBC و Bi (TPyP) ، على التوالي ( الشكل 2 ط). 

على ما يبدو ، تعمل كل من CBS و Bi (TPP) في مراحل ما بعد الدخول. باختصار ، لقد أظهرنا قابلية تعرض SARS-CoV-2 للعلاج بالأدوية التي تعتمد على البزموت (III).

العلاج العلاجي باستخدام كرات الدم الحمراء يخفف من مرض السارس- CoV-2

RBC هو دواء شائع الاستخدام سريريًا لعلاج عدوى هيليكوباكتر بيلوري والقرحة الهضمية وله ملف تعريف أمان موثق جيدًا.

 يتكون RBC من سترات البزموت ورانيتيدين. 

أظهرنا أن الرانيتيدين وحده يفتقر إلى تأثير كبير مضاد لـ SARS-CoV-2 (بيانات موسعة الشكل 3) ، بينما أظهر RBC مؤشر انتقائية أعلى بكثير (975) من البزموت وحده. 

لذلك استخدمنا RBC للتقييم المضاد للفيروسات في الجسم الحي. أظهرت دراسات الحرائك الدوائية السابقة أن كرات الدم الحمراء لديها امتصاص سريع نسبيًا (tmax (bismuth) ≈ 0.5 ساعة ، tmax (رانيتيدين) ≈ 2.5 ساعة) وتصفية كلوية صغيرة 

(CLr (بزموت) ≈ 40 مللي دقيقة − 1) ، مع سلوكيات حركية دوائية خطية ضمن نطاق الجرعة 24. أنشأنا مؤخرًا نموذجًا في الجسم الحي لمحاكاة المظاهر السريرية والمرضية لـ COVID-19 في الهامستر السوري الذهبي ، والتي تعمل كأداة مناسبة لدراسة التأثيرات المضادة للفيروسات وتسبب المرض. 

في دراستنا التجريبية ، أظهر الحقن داخل الصفاق لكرات الدم الحمراء بجرعة 150 مجم لكل كيلوغرام من وزن الجسم في اليوم سمية ضئيلة في الحيوانات. 

تم تضمين Remdesivir كعقار تحكم إيجابي وجرعته عند 15 مجم لكل كجم من وزن الجسم يوميًا بناءً على جرعته الفعالة في الفئران المصابة بفيروس SARS-CoV. 

في هذه الدراسة ، تم تحدي الهامستر عن طريق الأنف باستخدام 104 وحدات لتشكيل اللويحات (p.f.u.) SARS-CoV-2 قبل أربع جرعات يومية متتالية تبدأ عند 6 hpi. 

من المتوقع أن يكون الهامستر المُعالج بـ DMSO قد طور العلامات السريرية للخمول ، والفراء المتطاير ، ووضعية الظهر المنحنية ، والتنفس السريع بدءًا من يومين بعد الإصابة (d.p.i.) ، 

في حين أن الهامستر الذي عولج إما بـ RBC أو remdesivir لم تظهر عليه أي علامات سريرية.

 عند 4 نقطة في البوصة ، عندما كان من المتوقع أن تكون الأحمال الفيروسية والتغيرات النسيجية المرضية هي الأبرز في هذا النموذج الحيواني الراسخ ، 

قمنا بفحص ما إذا كان RBC يمنح الحماية ضد تحدي SARS-CoV-2 عن طريق تقليل الأحمال الفيروسية في الجزء العلوي (المحارة الأنفية) و أنسجة الجهاز التنفسي السفلي (الرئة). 

على ما يبدو ، قلل RBC من حمل الحمض النووي الريبي الفيروسي في كل من المحارة الأنفية (P <0.05) وأنسجة الرئة (P <0.01) بمقدار 1 إلى 1.5 سجل تقريبًا (الشكل 3 أ). باستمرار ، تم تأكيد قمع الجسيمات الفيروسية الحية لـ SARS-CoV-2 في الجهاز التنفسي في كل من الهامستر المعالج بالـ RBC و Remdesivir (الشكل 3 ب).

أ ، ب ، الهامستر (ن = 5) تم تلقيحها عن طريق الأنف بـ 104 pf.u. من SARS-CoV-2 وداخل الصفاق تعطى إما DMSO (التحكم في السيارة) أو RBC (150 مجم كجم / 1) أو Remdesivir (15 مجم كجم) لمدة أربعة أيام متتالية ، مع إعطاء الجرعة الأولى عند 6 hpi. 

عند 4 ديسيبل في البوصة ، تم تحديد الإنتاجية الفيروسية لأنسجة الجهاز التنفسي في المحارة الأنفية وأنسجة الرئة للهامستر بواسطة مقايسة qRT-PCR (أ) والجرعة المعدية (ب) من زراعة الأنسجة الوسيطة (TCID50) على التوالي.

 c ، chemokine التمثيلي وتقييم السيتوكينات لأنسجة الرئة (ن = 3) من المجموعات المشار إليها ، كما تم الكشف عنها في تجانس أنسجة الرئة عند 4 ديسيبل متوحد الخواص.

 يتم عرض النتائج على أنها تعني ± sd. * P <0.05 ، ** P <0.01 و *** P <0.001 بالمقارنة مع مجموعة DMSO. NS ، ليس كبيرا. 

تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه.

 د ، هـ ، صور وتسجيل التغيرات النسيجية المرضية لرئة الهامستر عند 4 ديسيبل في البوصة. 

الصور التمثيلية لقسم أنسجة الرئة الملطخة H & E من الهامستر المصاب الوهمي (د) والهامستر المصاب المعالج بـ DMSO تظهر توحيد أنسجة الرئة المنتشرة مع التسلل السنخي والنضح (هـ). 

تظهر المناطق المرقمة المحاطة بدائرة في صور مكبرة إلى اليمين ، توضح 

(1) موت الخلايا الظهارية القصبية (السهم) وتسلل الخلايا أحادية النواة المحيطة بالقرص (رأس السهم) ؛ 

(2) تدمير الحويصلات الهوائية مع تسلل الفضاء السنخي الهائل (رأس السهم) ؛ 

(3) اثنين من الأوعية الدموية التي تظهر تسلل داخل البطانة (الأسهم) وتسلل حول الأوعية الدموية (رأس السهم). 

f ، g ، صور تمثيلية لقسم أنسجة الرئة الملطخة بـ H & E من الهامستر المعالج بـ Remdesivir (f) و RBC (g) ، مما يظهر ارتشاحًا مخففًا ، كما هو موضح في السنخ والأوعية الدموية. 

شريط النطاق ، 500 ميكرومتر (د - ز). ح ، النتيجة النسيجية تشير إلى شدة الأنسجة الرئوية في كل مجموعة. 

يتم تقديم البيانات على أنها تعني ± sd. من أربع شرائح تم اختيارها عشوائيًا من كل مجموعة. 

اختبار t للطالب ثنائي الذيل غير المزدوج ، *** P <0.001 عند مقارنته بمجموعة التحكم DMSO. 

تم تعيين الدرجة النسيجية للعدوى الوهمية على أنها صفر. i - l ، صور تمثيلية لتوزيع البروتين N الفيروسي في أقسام أنسجة الرئة من مجموعات الهامستر غير المصابة (i) والهامستر المصابة المعالجة بـ DMSO (j) و remdesivir (k) و RBC (l) ، عند 4 ديسيبل في البوصة. 

يظهر التعبير البروتيني الفيروسي N في المناطق السنخية المنتشرة (الأسهم البيضاء السميكة) وفي الخلايا الظهارية القصبية البؤرية (الأسهم البيضاء الرقيقة). 

تم اختيار هذه الصور التمثيلية من بين مجموعة تضم أكثر من 30 صورة تم التقاطها في ثلاثة هامستر تم اختيارها عشوائيًا لكل مجموعة. شريط النطاق ، 200 ميكرومتر (i – l).

يرتبط زيادة إفراز السيتوكينات والكيموكينات المؤيدة للالتهابات مع شدة المرض لدى مرضى COVID-1927.

 للتأكد مما إذا كان التأثير العلاجي لخلل تنظيم السيتوكينات الناجم عن الفيروس من كريات الدم الحمراء ، حددنا مستويات التعبير عن إنترلوكين 6 (IL-6) وإنترلوكين 10 (IL-10) وعامل نخر الورم ألفا (TNF-α) ، والتي هي علامات تنبؤية لـ COVID-19 الشديدة ، بالإضافة إلى السيتوكينات الرئيسية الأخرى المؤيدة للالتهابات 

والكيموكينات بما في ذلك interferon-γ (IFN-γ) ، و CC motif chemokine ligand 22 (CCL22) و CC chemokine receptor type 4 (CCR4). 

من المثير للاهتمام أن تعبير mRNA عن IFN-(P <0.05) و IL-6 (P <0.01) و IL-10 (P <0.001) و CCR4 (P <0.05) قد تقلص بشكل ملحوظ في الهامستر الذي عولج بـ RBC ،

 في حين أن تلك عولجت ريمسفير بشكل عام كانت أقل تغيرات ولكن غير مهمة إحصائياً (باستثناء IL-6) مقارنة بالحيوانات المعالجة بـ DMSO (الشكل 3 ج).

 قد يُعزى هذا إلى قدرة تعديل المناعة على الاستجابة الالتهابية المضطربة لمسببات الأمراض لكرات الدم الحمراء في خلايا الثدييات ، بالإضافة إلى آثارها المباشرة المضادة للفيروسات.

لتوفير مراقبة واضحة للمرض ، تم إجراء الفحص النسيجي لأنسجة الرئة الملطخة بالهيموتوكسيلين والأيوزين (H&E) عند 4 ديسيبل في البوصة. 

لوحظ تحسن كبير في تلف الرئة بعد علاج كرات الدم الحمراء (الشكل ثلاثي الأبعاد - ز). في مجموعة التحكم DMSO ، تم تحديد مساحة كبيرة من التوحيد والتسلل الهائل للخلايا أحادية النواة وحيدة النواة في رئات الحيوانات ،

 بالإضافة إلى شدة معتدلة لموت الخلايا الظهارية القصبية (الشكل ثلاثي الأبعاد). 

بالإضافة إلى ذلك ، لوحظ تسلل الخلايا أحادية النواة البطانية وجدار الوعاء الدموي في الأوعية الدموية الرئوية (الصور المكبرة ، الشكل ثلاثي الأبعاد). 

أظهرت أنسجة الرئة في مجموعة علاج remdesivir تحسنًا في التشكل ولكن درجة خفيفة من تسلل جدار القصبات الهوائية وتسلل جدار الوعاء الدموي (الشكل 3 هـ). 

ومع ذلك ، بعد علاج RBC ، كان هناك سماكة طفيفة للجدار السنخي وتسلل خفيف حول الجلد

الكشف عنها ، دون تغيرات التهابية مرئية في الأوعية الدموية (الشكل 3 و). 

أشار تلطيخ التألق المناعي إلى تناقص تعبير البروتين N في الأنسجة السنخية ، والذي يتم التعبير عنه بشكل أساسي في الخلايا الظهارية القصبية البؤرية لرئتي الهامستر بعد العلاج باستخدام Remdesivir و RBC (الشكل 3h-j). 

بشكل جماعي ، نظهر بالتالي فعالية كرات الدم الحمراء من خلال تعطيل دورة تكرار SARS-CoV-2 والالتهاب الرئوي المرتبط بالفيروس في الجسم الحي.

RBC هو مثبط قوي لا رجعة فيه لـ SARS-CoV-2 هيليكس في المختبر

لقد أوضحنا سابقًا أن عقاقير البزموت (III) تعمل عبر آلية "البندقية" ، أي استهداف مسارات بيولوجية متعددة من خلال الارتباط بالبروتينات الرئيسية ، ولا سيما البروتينات المحتوية على الزنك.

 بالنظر إلى أن الزنك غالبًا ما يتم إدراجه كأصابع الزنك أو مجالات ربط الزنك في العديد من Nsp الأساسية لفيروس كورونا 

(على سبيل المثال ، PLpro cysteine ​​protease ، RNA المعتمد على RNA polymerase13 و helicase33) ، افترضنا أن البزموت (III) قد يعطل هذه الإنزيمات وظيفيًا ، وبالتالي يحظر التكاثر الفيروسي لـ SARS-CoV-2.

 كدليل على المبدأ ، اخترنا هيليكاز SARS-CoV-2 كهدف ممكن للتحقيق فيما إذا كانت مركبات البزموت (III) يمكن أن تعطل الإنزيم. 

Helicases عبارة عن بروتينات حركية تعمل على تحويل nucleoside triphosphate إلى nucleoside diphosphate والفوسفات غير العضوي أثناء نقل الحمض النووي أحادي الجديلة وفصل الحمض النووي المزدوج (ds) وفك كل من 

dsRNA و dsDNA مع ذيل 5′-ss على طول القطبية من 5 إلى 3 (المرجعان 34 ، 35). أظهرت الدراسات التراكمية أن فيروس الحمض النووي الريبي لن ينسخ أو يصنع جينوم الحمض النووي الريبي الخاص به بدون هليكاز وظيفي.

 على عكس البروتينات الهيكلية لفيروسات كورونا ، فقد ثبت أن الهليكازات (Nsp13) محفوظة بين أنواع فيروسات التاجية وثيقة الصلة (على سبيل المثال ، SARS- و MERS-Nsp13) ، 

مما يشير إلى إمكانات مثبطات SAR-CoV-2 هيلياز. فئة جديدة من العلاج المضاد للفيروسات لـ COVID-19 والتهابات الجهاز التنفسي التي تسببها فيروسات كورونا الأخرى.

لاستكشاف الدور المحتمل لـ RBC على هليكاز SARS-CoV-2 ، قمنا أولاً بإفراط في التعبير عن البروتين Nsp13 كامل الطول وتنقيته (بيانات موسعة الشكل 4) 

a-d ، تثبيط نشاط ATPase لـ SARS-CoV-2 هيليكاز بواسطة CBS (a) ، RBC (b) ، Bi (TPP) (c) و Bi (TPyP) (d) ، بتركيزات مختلفة كما هو محدد. 

e-h ، معايرة نشاط تفكيك الحمض النووي لـ SARS-CoV-2 هيليكاز بواسطة CBS (e) و RBC (f) و Bi (TPP) (g) و Bi (TPyP) (h) ، بتركيزات مختلفة ، كما يتضح من الفحص القائم على الحنق. 

في a - h ، يتم التعبير عن البيانات كنسبة مئوية من تفاعل التحكم في حالة عدم وجود مثبطات.

 تم تحديد منحنيات الجرعة والاستجابة لقيم نصف التركيز المثبط القصوى (IC50) عن طريق الانحدار غير الخطي. i ، j ، استعادة نشاط ATPase (i) ونشاط فك الحمض النووي لـ Bi-SARS-CoV-2 هيليكاز (ي) بعد التكميل بنسب مختلفة من الزنك (II) كما هو محدد. 

تم إجراء جميع الاختبارات في a-j في ثلاث نسخ وتم تقديم البيانات على أنها متوسط ​​± sd. k ، l ، مخططات Lineweaver-Burk التي تُظهر حركية تثبيط نشاط ATPase (k) ونشاط تفكيك الحمض النووي لـ SARS-CoV-2 هيليكاز (l) بواسطة RBC.

 تم تحديد تأثير المثبطات على الإنزيم من المؤامرة التبادلية المزدوجة من 1 / معدل (1 / V) مقابل تركيز 1 / ركيزة في وجود تركيزات مختلفة من كرات الدم الحمراء. 

تم حساب قيم Ki عن طريق تقاطع المنحنيات التي تم الحصول عليها عن طريق رسم 1 / V مقابل تركيز المثبط لكل تركيز ركيزة.

 في أ - ط ، تعتمد مقاييس تركيز الدواء على المحتوى المعدني. يتم عرض القيمة المتوسطة لثلاث مكررات وتشير أشرطة الخطأ إلى ± sd. من n = 3 مكررات مستقلة. 

تم حساب الدلالة الإحصائية باستخدام اختبار الطالب غير المزدوج الذيل. تم تكرار جميع التجارب مرتين للتأكيد.

، والذي يحتوي على مجال ربط الزنك بالطرف N (ZBD) و C - مجال هيليكاز النهائي (HEL). 

من خلال إجراء مقايسة إطلاق الفوسفات النموذجية ، قمنا أولاً بفحص ما إذا كانت مركبات البزموت (III) تمنع نشاط ATPase الخاص بـ SARS-CoV-2 هيليكاز. 

يتم تقديم الفوسفات الناتج عن التحلل المائي لـ ATP كنسبة مئوية نسبية من نشاط ATPase مع أو بدون إضافة مركبات البزموت (III). 

كما هو مبين في الشكل 4 أ-د ، انخفض نشاط ATPase بشكل ملحوظ مع زيادة تركيز البزموت (III) ، مع تثبيط النشاط ، في النهاية ، أكثر من 90٪. تم حساب قيم نصف الحد الأقصى للتركيز المثبط (IC50) لتكون 1.88 ± 0.12 ، 0.69 ± 0.12 ، 2.39 ± 0.02 و 4.68 ± 1.39 ميكرومتر لـ CBS ، RBC ، Bi (TPP) و Bi (TPyP) ، على التوالي (البيانات الموسعة الشكل .5) ، 

أ ، فرق الأشعة فوق البنفسجية مقابل الأطياف لمعايرة الأضراس المختلفة المكافئة للبزموت (III) مع هليكاز apo-SARS-CoV-2. 

يُظهر الشكل الداخلي منحنى معايرة مرسومًا عند 340 نانومتر تقريبًا مقابل النسبة المولية لـ [البزموت (III)] / [apo-SARS-CoV-2 هيليكاز]. 

تم إجراء الاختبارات مرتين وعرض البيانات التمثيلية. 

ب ، استبدال الزنك (II) في SARS-CoV-2 هيليكاز بواسطة البزموت (III) على غسيل الكلى المتوازن. 

تم تحديد المحتويات المعدنية من الزنك (II) والبزموت (III) بواسطة ICP-MS. 

يتم عرض القيم المتوسطة لثلاث مكررات وتشير أشرطة الخطأ إلى ± sd. في أ و ب ، تعتمد مقاييس تركيزات الدواء على المحتوى المعدني. تم تكرار جميع التجارب مرتين للتأكيد.

مما يدل على التثبيط الفعال لنشاط ATPase لـ SARS-CoV-2 هيليكاز بواسطة RBC ومركبات البزموت (III) 

قمنا بعد ذلك بالتحقيق في تأثيرات مركبات البزموت الأربعة (III) على نشاط الفك المزدوج لطائرة SARS-CoV-2 من خلال اختبار قائم على نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET).

 نظرًا لأن كلا من dsDNA و dsRNA يمكن فكهما بواسطة SARS-CoV-2 Helicase ، لأسباب عملية اخترنا dsDNA كركيزة لتقييم النشاط المثبط للمركبات المختبرة.

 تم تحضير ركيزة DNA-duplex عن طريق صلب أوليغومير مع فلوروفور Cy3 في نهاية 3 وإخماد BHQ2 في نهاية 5.

 تمت معايرة البروتينات ومزدوجة الحمض النووي في وجود تركيزات مختلفة من مركبات البزموت قبل معايرة الفلورة. 

في حالة عدم وجود مركبات البزموت (III) ، زادت شدة إشارة مزدوج الحمض النووي بشكل كبير بسبب فك حبلا Cy3 من مزدوج الحمض النووي عبر هيليكاز.

 على النقيض من ذلك ، زاد التألق بشكل أقل وضوحًا عند زيادة تركيزات مركبات البزموت (III) ، مما يدل على تثبيط فك اللف المزدوج بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل 4 هـ - ح).

 وبالمثل ، تم قياس قيم IC 50 للمركبات مقابل نشاط فك اللفة المزدوج للإنزيم لتكون 1.24 ± 0.02 ميكرومتر لـ CBS ، 0.74 ± 0.13 ميكرومتر لـ RBC ، 3.69 ± 0.26 ميكرومتر لـ Bi (TPP) و 2.64 ± 0.16 ميكرومتر لـ Bi (TPyP) (بيانات موسعة الشكل 5). 

بشكل ملحوظ ، كان هذا التثبيط لا رجعة فيه ، حيث أن إضافة ما يصل إلى 50 مولارًا مكافئًا من الزنك (II) إلى هليكاز SARS-CoV-2 المرتبط بالبزموت أدى فقط إلى ~ 6 ٪ من نشاط ATPase و ~ 13 ٪ من نشاط فك اللف المزدوج الذي يتم استعادته ،

 يشير إلى قدرة محدودة من الزنك (II) للتنافس مع البزموت (III) لـ SARS-CoV-2 هيليكاز (الشكل 4i ، j).

 أدت زيادة تركيزات كرات الدم الحمراء إلى تغيير قيمة السرعة القصوى (Vmax) البالغة 42.05 ± 2.78 ملي مولار ثانية ، في حين لوحظت زيادة في ثابت ميكايليس-

مينتين الظاهر (Km) من 5.51 إلى 12.74 ملي مول ، مما يدل على تثبيط تنافسي على ATPase نشاط هليكاز SARS-CoV-2 (الشكل 4 كيلو ، ل). 

تم تقدير ثابت التثبيط (Ki) لـ RBC ضد نشاط ATPase الهليكي بـ 0.97 ± 0.11 ميكرومتر. 

وبالمثل ، أظهر RBC وضعًا تنافسيًا للتثبيط على نشاط فك الإرسال المزدوج للطائرة ، مع قيمة Vmax غير متغيرة تبلغ 20.53 ± 1.56 نانومتر دقيقة − 1 ، مما أدى إلى زيادة قيم الكيلومتر من 42.21 نانومتر إلى 91.77 نانومتر وقيمة K المقدرة بـ 0.39 ± 0.07 ميكرومتر. 

توضح بياناتنا المجمعة أن كرات الدم الحمراء تعمل كمثبط قوي لا رجعة فيه لـ SARS-CoV-2 هيليكاز.

يرتبط RBC بـ SARS-CoV-2 هيليكاز ويطلق أيونات الزنك من ZBD في المختبر

أظهر التحليل الهيكلي أن هيليكاز الفيروس التاجي السارس يحتوي على ثلاثة أصابع زنك أساسية ، بما في ذلك إصبع الزنك 1 (Cys5 ، Cys8 ، Cys26 ، Cys29) ، إصبع الزنك 2 (Cys16 ، Cys19 ، His33 ، His39) وإصبع الزنك 3 (Cys50 ، Cys55، Cys72، His75) 33. 

نظرًا لارتفاع درجة محبة البزموت (III) ، فقد بحثنا ، بواسطة التحليل الطيفي للأشعة فوق البنفسجية - المرئية ، فيما إذا كان البزموت (III) يتنافس مع الزنك (II) في مواقع أصابع الزنك.

 لاستبعاد تداخل الرانيتيدين في كرات الدم الحمراء ، تم تحضير مركب بزموت عديم اللون ، Bi (NTA) ، ثم تمت معايرته إلى شكل apo من SARS-CoV-2 هيليكاز.

 أدت إضافة البزموت (III) إلى هليكاز apo-SARS-CoV-2 إلى ظهور وزيادة نطاق الامتصاص عند حوالي 340 نانومتر ، وهي سمة من سمات نطاق نقل الشحنة (LMCT) Bi – S ligand-to-metal. 

كما هو مبين في الشكل 5 أ ، زادت شدة الامتصاص عند 340 نانومتر ثم استقرت عند نسبة مولارية من [Bi (III)] / [SARS-CoV-2 هيليكاز] من 3 ، مع ثابت تفكك (Kd) 1.38 ± 0.05 ميكرومتر كما هو محدد من خلال تركيب البيانات مع معادلة ريان ويبر اللاخطية. 

تشير النتائج إلى أن ثلاثة أيونات البزموت (III) ترتبط بكل هليكاز SARS-CoV-2 وأن بقايا السيستين في مواقع أصابع الزنك متورطة في الارتباط.

بعد ذلك ، باستخدام مطياف كتلة البلازما المقترن بالحث (ICP-MS) ، سألنا عما إذا كان ارتباط البزموت (III) بهليكاز SARS-CoV-2 قد أدى إلى إطلاق الزنك (II). 

باستخدام غسيل الكلى المتوازن ، أظهرنا أن حوالي 3.46 مولار مكافئ من Zn (II) مرتبط بـ SARS-CoV-2 هيليكاز.

 أدت معايرة كرات الدم الحمراء إلى هليكاز SARS-CoV-2 إلى انخفاض في القياس المتكافئ لأيونات الزنك (II) ، مصحوبة بزيادة في البزموت (III) إلى هليكاز SARS-CoV-2 ؛ في النهاية ،

 تم تهجير ما يقارب 2.90 مولار مكافئ لـ Zn (II) ، في حين أن حوالي 2.73 مولاري مكافئ للبزموت (III) مرتبط بالإنزيم (الشكل 5 ب). 

أكدت البيانات أن تثبيط هليكاز SARS-CoV-2 بواسطة RBC يُعزى إلى إزاحة Zn (II) في هليكاز SARS-CoV-2 بواسطة أيونات البزموت (III).

نقاش

تاريخيا ، تم استخدام المركبات المعدنية كعوامل مضادة للميكروبات. 

ومع ذلك ، نادرًا ما تم استكشاف فائدتها في العلاج المضاد للفيروسات. 

في هذه الدراسة ، نوضح إمكانات العقاقير المعدنية والمركبات ذات الصلة لعلاج COVID-19 ، مما يوفر استراتيجية للتدخل في SAR-CoV-2 وربما الالتهابات الفيروسية الأخرى. 

لقد حددنا كرات الدم الحمراء كعامل فعال مضاد لـ SAR-CoV-2 ، سواء في المختبر أو في الجسم الحي ، والذي يستهدف الهليكاز الفيروسي (الأشكال 1-5 والبيانات الموسعة الشكل 2). 

بالمقارنة مع أدوية / مركبات البزموت (III) الأخرى ، تعمل مجموعة رانيتيدين في كرات الدم الحمراء على استقرار مركب [Bi (سترات)] في محلول مائي ، مما يؤدي إلى أداء أفضل لمكافحة SARS-CoV-2. 

الأهم من ذلك ، أن فعاليته في نموذج الهامستر المعمول به لـ COVID-19 يمكن مقارنتها أو حتى أفضل من redemsivir ، والتي تمت الموافقة عليها مؤخرًا من قبل الولايات المتحدة لاستخدامها في حالات الطوارئ كعلاج COVID-19 ، على الرغم من آثاره الجانبية غير المحددة طويلة المدى . 

RBC هو مضاد جيد التحمل وفعال لـ H. الملوية البوابية والأدوية المضادة للقرحة 40. قد يسهل ملف الأمان المميز على نطاق واسع استخدامه الفوري في التجارب السريرية للمرضى المصابين بـ COVID-19.

 يُعتقد أن الجهاز الهضمي هو طريق انتقال محتمل وعضو مستهدف لـ SARS-CoV-241 ، ومن المعروف أن كرات الدم الحمراء تحافظ على نشاط دوائي جيد داخل بيئة الجهاز الهضمي. 

أظهر فحصنا لـ RBC على خلايا القولون (Caco-2) نشاطه القوي لقمع تكرار SARS-CoV-2 (الشكل 1) ، والذي قد يدعم استخدام كرات الدم الحمراء لتقييد المظاهر المعدية المعوية التي يسببها الفيروس والانتقال المحتمل للبراز والفم. من COVID-19.

اقترحت الأدلة المتزايدة ، بما في ذلك النتائج التي توصلنا إليها مؤخرًا في تجربة عشوائية ، ميزة العلاج المركب الذي يستهدف خطوات متعددة في دورة حياة الفيروس لـ SARS-CoV-2. 

حقق العلاج الثلاثي المكون من interferon-β1b و lopinavir / ritonavir و ribavirin تخليصًا أسرع للفيروسات وتحسنًا سريريًا بشكل أسرع من العلاج الأحادي باستخدام lopinavir / ritonavir.

 تحدث المظاهر متعددة الأنظمة لـ COVID-19 عن مزيج من تلف الخلايا الناجم عن الفيروس والأمراض المناعية مع الاستجابات الالتهابية غير المنتظمة. 

تؤدي عاصفة السيتوكينات غير المنتظمة جنبًا إلى جنب مع ضعف نظام الدورة الدموية إلى خلل خاطف متعدد الأعضاء يؤثر على الرئتين والقلب والكبد والكلى والعضلات والجهاز الهضمي والجهاز العصبي. 

من المعروف أن مركبات البزموت تعرض أنشطتها المضادة للبكتيريا عن طريق تعطيل خطوات متعددة من دورة تكرار البكتيريا. 

في هذه الدراسة ، أظهرنا أن كلاً من خطوات الدخول وما بعد الدخول لدورة تكرار SARS-CoV-2 مستهدفة بواسطة RBC (الشكل 2 ح ، ط).

 لقد استخدمنا هيليكاز كمثال توضيحي لإثبات التفاعل في المختبر لـ RBC مع إنزيم فيروسي ، أي تعطيل وظيفة الإنزيم بشكل لا رجعة فيه عن طريق إطلاق الزنك الحيوي (II) وربما تكوين إنزيم غير وظيفي مرتبط بالأدوية المعدنية في السارس - الخلايا المصابة بفيروس كورونا 2 (الشكلان 4 و 5). 

يجب إجراء مزيد من التجارب للتحقيق في الآليات الأخرى المضادة للفيروسات بالإضافة إلى تثبيط الهلياز. 

بالنظر إلى أن العناصر الرئيسية (مثل أصابع الزنك) في الإنزيمات الفيروسية محفوظة بشكل كبير ، فقد تعمل كرات الدم الحمراء كمثبط واسع الطيف ضد فيروس كورونا. 

يسلط مؤشر الانتقائية العالي والسلامة المعتمدة لـ RBC الضوء على إمكانات هذا الدواء ليتم اعتماده بسرعة لعلاج مرض COVID-19 بعد مزيد من التحقق السريري.

على الرغم من أن نتائجنا الإجمالية في هذه الدراسة كانت مشجعة ، فقد تم تحديد العديد من القيود.

 أولاً ، إن ذروة تركيز مصل الدم من كرات الدم الحمراء التي تم تحقيقها عن طريق الجرعات الفموية القياسية في البشر (Cmax ، 33 نانوغرام مل -1) أقل من EC50 (ما يعادل 480 نانوغرام مل) ضد SARS-CoV-2 في خلايا Vero E6 غير البشرية .

 ومع ذلك ، أظهر علاج كرات الدم الحمراء داخل الصفاق للهامستر نتائج سريرية وفيروسية ومرضية أفضل بشكل ملحوظ ، والتي قد تكون بسبب تركيز الدواء المحلي الأعلى الذي تحقق في رئتي الهامستر. 

تشير نتائجنا إلى الحاجة إلى توصيف أفضل للديناميكا الدوائية والحركية الدوائية لكرات الدم الحمراء بالحقن والمركبات ذات الصلة في نماذج حيوانية مناسبة وبشر لتسهيل المزيد من التحسين التناظري والاستخدام السريري. 

يمكن أيضًا تفسير التباين من خلال خلايا Vero E6 المستخدمة في قياسات EC50 ؛ هذه لا تعبر عن TMPRSS2 ، وهو محدد دخول رئيسي لـ SARS-CoV-244. 

على ما يبدو ، تم تحقيق كفاءة مثبطة أعلى بواسطة RBC في خلايا Calu-3 (TMPRSS2 +) من تلك الموجودة في خلايا Vero E6 (TMPRSS2−) ، مما يشير إلى أن RBC يتداخل مع إدخال فيروس TMPRSS2 (P <0.01 ، البيانات الموسعة الشكل 6) ). 

ثانيًا ، بالإضافة إلى تأثير البزموت (III) على الهليكاز الفيروسي ، فقد يؤثر أيضًا على البروتينات الفيروسية الأخرى المحتوية على الزنك. 

اخترنا الهليكاز الفيروسي كمثال توضيحي في هذه الدراسة لإثبات إحدى الآليات المحتملة المضادة للفيروسات للدواء من حيث إزاحة الزنك (II) ، لأن الهليكاز هو هدف محفوظ ويمكن استخدامه للتعاطي مع SARS-CoV-2 وغيره من مسببات الأمراض البشرية 10- الفيروسات التاجية.

 ومع ذلك ، فإن تربية طفرات الهروب ضرورية لتأكيد أن SARS-CoV-2 هيليكاز هي واحدة من أهداف المخدرات. 

يمكن أيضًا النظر في استغلال البروتينات وكيمياء النقر في الدراسات المستقبلية لتسهيل توضيح أهداف كرات الدم الحمراء المتعددة بطريقة غير متحيزة. 

ثالثًا ، يجب تقييم مشتقات كرات الدم الحمراء الإضافية في محاولة لتعزيز فعالية مضادات السارس- CoV-2 وتحليلات النشاط البنيوي. 

أخيرًا ، يجب تقييم الأنظمة التوافقية ("الكوكتيل") التي تتكون من الأدوية المعتمدة سريريًا والمتوفرة بسهولة والتي أظهرت نشاطًا مضادًا لـ SARS-CoV-2 ، مثل مزيج من RBC و dexamethasone و  ​​، في الدراسات المستقبلية.